原位雜交技術(shù)的原理是什么?有何用途
原位雜交技術(shù)的原理是利用核酸分子單鏈之間有互補(bǔ)的堿基序列,原位雜交試劑,將有性或非性的外源核酸(即探針)與組織、細(xì)胞或染色體上待測(cè)DNA或RNA互補(bǔ)配對(duì),結(jié)合成專一的核酸雜交分子,經(jīng)一定的檢測(cè)手段將待測(cè)核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來(lái)。為顯示特定的核酸序列要具備3個(gè)重要條件:組織、細(xì)胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補(bǔ)的核苷酸序列(即探針)、有與探針結(jié)合的標(biāo)記物(曾呈奎等2000)。
DNA 探針為原位雜交提供較高的靈敏度。與RNA探針相比,DNA探針與靶mRNA 分子的雜交強(qiáng)度較弱,因此在雜交后的洗滌中不應(yīng)使用甲醛。
探針特異性至關(guān)重要。如果已知細(xì)胞中mRNA或DNA的確切核苷酸序列,則可據(jù)此設(shè)計(jì)高度的互補(bǔ)探針。如果超過 5% 的堿基對(duì)不互補(bǔ),那么探針只能與靶序列發(fā)生輕度雜交。這意味著,探針更容易在洗滌和檢測(cè)步驟中被洗去,植物組織原位雜交,可能無(wú)法正確檢測(cè)。
原位雜交技術(shù)還在以下生物領(lǐng)域有應(yīng)用:
生態(tài)學(xué)和環(huán)境科學(xué):在生態(tài)學(xué)和環(huán)境科學(xué)領(lǐng)域,原位雜交,原位雜交技術(shù)可以用于研究生物與環(huán)境之間的相互作用。例如,通過標(biāo)記特定基因的探針,原位雜交檢測(cè),可以檢測(cè)環(huán)境中微生物種群的分布和變化,進(jìn)而研究其對(duì)環(huán)境的影響和作用。
進(jìn)化生物學(xué):在進(jìn)化生物學(xué)領(lǐng)域,原位雜交技術(shù)可以用于研究物種之間的遺傳差異和進(jìn)化關(guān)系。例如,通過比較不同物種之間基因序列的差異,可以揭示物種之間的親緣關(guān)系和進(jìn)化歷程。
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