植物染色體原位雜交技術(shù)的應(yīng)用非常廣泛。例如,它可以用來(lái)研究植物基因組的結(jié)構(gòu)和功能,包括基因定位、染色體重組、基因表達(dá)和基因組演化等方面。此外,該技術(shù)還可以用來(lái)檢測(cè)植物中的染色體異常,如染色體缺失、重復(fù)和易位等。
植物染色體原位雜交技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)在于它可以直接觀察到染色體上的目標(biāo)DNA序列,而不需要進(jìn)行PCR擴(kuò)增或測(cè)序等操作。此外,該技術(shù)還可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)DNA序列,從而提高檢測(cè)效率和準(zhǔn)確性。
一. 原位雜交天
1. 重新水化和固定
1) 吸取固定好的胚胎,加入50%的PBST溶液,放置5分鐘。
2) 置換成30%的PBST溶液,放置5分鐘
3) 置換成PBST溶液,放置5分鐘,重復(fù)一次
4) 置換成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘
5) 用PBST洗兩次,每次放置五分鐘,室溫。
蛋白酶處理與后固定(本實(shí)驗(yàn)不做此步)
1) 用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節(jié)以下的胚胎不處理,5體節(jié)到24小時(shí)的胚胎處理3分鐘,24小時(shí)以上的胚胎處理5分鐘或者更長(zhǎng)。發(fā)育時(shí)間越短的胚胎越嫩,可以不用或者少用蛋白酶處理,發(fā)育時(shí)間長(zhǎng)的胚胎就需要用蛋白酶來(lái)疏松組織,以便于雜交。
2) 用PBST溶液輕洗,在PBST中放置5分鐘。
3) 用4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘,室溫。
4) 用PBST洗兩次,每次放置五分鐘,室溫。
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