植物染色體原位雜交技術(shù)的應(yīng)用非常廣泛。例如,它可以用來研究植物基因組的結(jié)構(gòu)和功能,包括基因定位、染色體重組、基因表達(dá)和基因組演化等方面。此外,原位雜交檢測,該技術(shù)還可以用來檢測植物中的染色體異常,如染色體缺失、重復(fù)和易位等。
植物染色體原位雜交技術(shù)的優(yōu)點在于它可以直接觀察到染色體上的目標(biāo)DNA序列,熒光原位雜交,而不需要進(jìn)行PCR擴增或測序等操作。此外,該技術(shù)還可以同時檢測多個目標(biāo)DNA序列,從而提高檢測效率和準(zhǔn)確性。
原位雜交技術(shù)(in situhybridization)是以標(biāo)記的核酸分子為探針,在組織細(xì)胞原位檢測特異核酸分子的技術(shù)。使含有特異序列、經(jīng)過標(biāo)記的核酸單鏈即探針,在適宜條件下與組織細(xì)胞中的互補核酸單鏈即靶核酸發(fā)生雜交,再以自顯影或細(xì)胞化學(xué)方法對標(biāo)記探針進(jìn)行探測,從而在細(xì)胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。
可以檢測cRNA、miRNA、LnRNA、DNA??梢愿鞣N種屬的標(biāo)本,包括哺乳動物、爬行動物、菌、植物標(biāo)本。也可以檢測組織芯片。
菌落的裂解及DNA結(jié)合于纖維素濾膜
(1) 在一張保鮮膜上制作一個裝有0.5mol/L NaOH的小洼(0.75ml),使菌落面朝上,將濾膜放到小洼上,展平保鮮膜,湖北原位雜交,使濾膜均勻濕潤,染色體原位雜交,讓濾膜留于原處2-3分鐘。
(2) 用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜,用一張新的保鮮膜和新配制的0.5mol/L NaOH重復(fù)步驟(1)。
(3) 吸干濾膜,將濾膜轉(zhuǎn)移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4)的保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜,再重復(fù)一次該步驟。
(4) 吸干濾膜,把它轉(zhuǎn)移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4)的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜,轉(zhuǎn)移到一張干的濾紙上,置于室溫20-30分鐘,使濾膜干燥。
(5) 將濾膜夾在兩張干的濾紙之間,在真空烤箱中于80℃干烤2小時,固定DNA。
(6) 將固定在膜上的DNA與32 P標(biāo)記的RNA進(jìn)行雜交。
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