菌落的裂解及DNA結(jié)合于纖維素濾膜
(1) 在一張保鮮膜上制作一個(gè)裝有0.5mol/L NaOH的小洼(0.75ml),使菌落面朝上,將濾膜放到小洼上,熒光原位雜交,展平保鮮膜,染色體熒光原位雜交,使濾膜均勻濕潤,讓濾膜留于原處2-3分鐘。
(2) 用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜,用一張新的保鮮膜和新配制的0.5mol/L NaOH重復(fù)步驟(1)。
(3) 吸干濾膜,將濾膜轉(zhuǎn)移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4)的保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜,再重復(fù)一次該步驟。
(4) 吸干濾膜,把它轉(zhuǎn)移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4)的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜,轉(zhuǎn)移到一張干的濾紙上,置于室溫20-30分鐘,使濾膜干燥。
(5) 將濾膜夾在兩張干的濾紙之間,在真空烤箱中于80℃干烤2小時(shí),固定DNA。
(6) 將固定在膜上的DNA與32 P標(biāo)記的RNA進(jìn)行雜交。
植物原位雜交的應(yīng)用包括:
研究基因表達(dá):通過觀察熒光信號(hào)的位置和數(shù)量,可以確定目標(biāo)基因在植物組織中的表達(dá)模式和位置。
染色體定位:將目標(biāo)基因與染色體中的特定位置進(jìn)行比較,可以確定目標(biāo)基因在染色體中的位置和分布。
基因:通過原位雜交技術(shù),植物原位雜交,可以確定目標(biāo)基因的序列和位置,為基因提供重要的參考信息。
檢測(cè)物種或品種特異性:通過原位雜交技術(shù)可以檢測(cè)出不同物種或品種之間基因表達(dá)的差異,從而為物種或品種特異性研究提供依據(jù)。
遺傳育種:通過原位雜交技術(shù)可以檢測(cè)出不同品種之間基因表達(dá)的差異,從而為遺傳育種提供重要的參考信息。
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