植物原位雜交的應(yīng)用包括:
研究基因表達(dá):通過觀察熒光信號(hào)的位置和數(shù)量,可以確定目標(biāo)基因在植物組織中的表達(dá)模式和位置。
染色體定位:將目標(biāo)基因與染色體中的特定位置進(jìn)行比較,可以確定目標(biāo)基因在染色體中的位置和分布。
基因:通過原位雜交技術(shù),可以確定目標(biāo)基因的序列和位置,為基因提供重要的參考信息。
檢測(cè)物種或品種特異性:通過原位雜交技術(shù)可以檢測(cè)出不同物種或品種之間基因表達(dá)的差異,從而為物種或品種特異性研究提供依據(jù)。
遺傳育種:通過原位雜交技術(shù)可以檢測(cè)出不同品種之間基因表達(dá)的差異,從而為遺傳育種提供重要的參考信息。
這一原理對(duì)于檢測(cè)一個(gè)特異的mRNA在某一種生物體,或者某些組織切片、單個(gè)細(xì)胞里具體表達(dá)位置非常有用。該技術(shù)早應(yīng)用于60年代末期,染色體原位雜交,由于核酸分子雜交的特異性高,并可定位,因此該技術(shù)已被廣泛應(yīng)用,例如與細(xì)胞內(nèi)RNA進(jìn)行雜交以觀察該組織細(xì)胞中特定基因表達(dá)水平。原位雜交能在成分復(fù)雜的組織中進(jìn)行單一細(xì)胞的研究而不受同一組織中其他成分的影響,染色體熒光原位雜交,因此對(duì)于那些細(xì)胞數(shù)量少且散在于其他組織中的細(xì)胞內(nèi)DNA或RNA研究更為方便;同時(shí)由于原位雜交不需要從組織中提取核酸,原位雜交,對(duì)于組織中含量極低的靶序列有極高的敏感性,并可完整地保持組織與細(xì)胞的形態(tài),更能準(zhǔn)確地反映出組織細(xì)胞的相互關(guān)系及功能狀態(tài)。同一樣本可以多次做原位雜交實(shí)驗(yàn)嗎?
一般情況下,植物原位雜交,如果操作沒有得到理想的結(jié)果,是可以將探針洗滌然后進(jìn)行再次的雜交的。如果使用的是直標(biāo)型探針,還可以使用不同探針對(duì)同一樣本進(jìn)行反復(fù)雜交。針對(duì)不同的樣本,處理方法略有不同。
原位雜交實(shí)操中哪些因素比較重要?
重要的因素:溫度、光照、濕度和試劑的PH值。溫度和濕度直接影響著探針和目標(biāo)DNA的雜交效率;光照影響著熒光染料的強(qiáng)度,所以探針要避光保存,其已經(jīng)雜交的片子可用防熒光淬火劑封片且避光保存;各種試劑pH也要達(dá)到要求,這也直接關(guān)系到原位雜交的穩(wěn)定性。
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