原位雜交技術(shù)可以應(yīng)用于以下場(chǎng)景:
組織中病毒DNA/RNA的檢測(cè)和定位。例如,可以用于檢測(cè)EB病毒mRNA、人類狀瘤病毒和巨細(xì)胞病毒DNA等。
癌基因、抑癌基因及其他各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)及其變化的檢測(cè)。
檢測(cè)染色體的變化,如染色體數(shù)量異常和染色體易位等。
在植物基因組研究中的應(yīng)用。例如,通過與特定基因序列的探針進(jìn)行雜交,可以在植物染色體上定位到目標(biāo)基因的位置,染色體熒光原位雜交,進(jìn)而構(gòu)建遺傳圖譜,為植物育種和基因組研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
基因組原位雜交技術(shù)基因組原位雜交(Genome in situ hybridization,GISH)技術(shù)是20世紀(jì)80年代末發(fā)展起來的一種原位雜交技術(shù)。它主要是利用物種之間DNA同源性的差異,染色體原位雜交,用另一物種的基因組DNA以適當(dāng)?shù)臐舛茸鞣庾?,在靶染色體上進(jìn)行原位雜交。GISH技術(shù)初應(yīng)用于動(dòng)物方面的研究(Pinkel et al.,湖北原位雜交,1986),原位雜交檢測(cè),在植物上早應(yīng)用于小麥和栽培種的鑒定(余舜武等 2001;王文奎等 2000)。原位雜交技術(shù)的技術(shù)流程
原位雜交技術(shù)的技術(shù)流程包括樣本處理、探針制備、雜交反應(yīng)和信號(hào)檢測(cè)等步驟。樣本處理包括組織或細(xì)胞的固定、包埋、切片和脫氧核糖核酸酶消化等步驟,目的是保持組織或細(xì)胞的原始結(jié)構(gòu)和核酸序列的完整性。探針制備包括標(biāo)記探針、純化和變性等步驟,目的是提高探針的特異性和敏感性。雜交反應(yīng)包括預(yù)雜交、雜交和洗脫等步驟,目的是使探針與目標(biāo)核酸序列形成雙鏈復(fù)合物。信號(hào)檢測(cè)包括顯色反應(yīng)、熒光染色和性同位素標(biāo)記等步驟,目的是可視化目標(biāo)核酸序列的分布。
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