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雜交?。?) 盛有2×SSC的塑料盤同,將干烤的濾膜飄浮在液面上,染色體原位雜交,浸濕5分鐘。(2) 將濾膜轉(zhuǎn)到200ml預洗液的玻璃皿中。濾膜何疊在一起,放于溶液中。用保鮮膜蓋住玻璃皿,放到位于培養(yǎng)箱內(nèi)的旋轉(zhuǎn)平臺上。于50℃處理30分鐘。在這一步及以后的所有步驟中,應緩緩搖動濾膜,防止它們粘在一起。(3) 用泡過預洗液的吸水棉紙輕輕地從膜表面拭去細菌碎片,以降低雜交背景而不影響陽性雜交信號的強度和清晰度。(4) 將濾膜轉(zhuǎn)到盛有150ml預雜交液的玻璃中,在適宜溫度(即在水溶液中雜交時用68℃,而在50%甲酰胺中雜交時用42℃)下,預雜交1-2小時。

FISH是原位雜交技術(shù)大家族中的一員,因其所用探針被熒光物質(zhì)標記(間接或直接)而得名,該方法在80年代末 被發(fā)明,現(xiàn)已從實驗室逐步進入臨床診斷領(lǐng)域?;驹硎菬晒鈽擞浀暮怂崽结樤谧冃院笈c已變性的靶核酸在退火 溫度下復性;通過熒光顯微鏡觀察熒光信號可在不改變被分析對象(即維持其原位)的前提下對靶核酸進行分析。DNA熒光標記探針是其中常用的一類核酸探針。利用此探針可對組織、細胞或染色體中的DNA進行染色體及基因水平 的分析。熒光標記探針不對環(huán)境構(gòu)成污染,靈敏度能得到保障,可進行多色觀察分析,因而可同時使用多個探針,縮 短因單個探針分開使用導致的周期過程和技術(shù)障礙。

植物組織原位雜交技術(shù)在植物基因表達和調(diào)控研究中具有廣泛的應用。它可以用來研究植物發(fā)育、生長、逆境響應等方面的基因表達模式和調(diào)控機制。例如,可以利用該技術(shù)研究植物中的轉(zhuǎn)錄因子、信號轉(zhuǎn)導通路、代謝途徑等基因的表達和調(diào)控。此外,植物組織原位雜交技術(shù)還可以用來鑒定植物中的病原體、檢測植物等方面。

總之植物組織原位雜交技術(shù)是一種重要的分子生物學技術(shù),可以用來研究植物基因的表達和調(diào)控。它具有操作簡便、結(jié)果可靠、應用廣泛等優(yōu)點,是植物分子生物學研究中不可或缺的工具。

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