DNA 探針為原位雜交提供較高的靈敏度。與RNA探針相比,DNA探針與靶mRNA 分子的雜交強(qiáng)度較弱,因此在雜交后的洗滌中不應(yīng)使用甲醛。
探針特異性至關(guān)重要。如果已知細(xì)胞中mRNA或DNA的確切核苷酸序列,則可據(jù)此設(shè)計(jì)高度的互補(bǔ)探針。如果超過 5% 的堿基對(duì)不互補(bǔ),GISH,那么探針只能與靶序列發(fā)生輕度雜交。這意味著,探針更容易在洗滌和檢測(cè)步驟中被洗去,可能無法正確檢測(cè)。
熒光原位雜交(Fluorescence In Situ Hybridization,F(xiàn)ISH)是在性原位雜交技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非性分子生物學(xué)和細(xì)胞遺傳學(xué)結(jié)合的新技術(shù),是以熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)記而形成的一種新的原位雜交方法。
FISH技術(shù)具有許多優(yōu)點(diǎn),如非性、高特異性、高靈敏度、快速簡便、可多重染色等。這些特點(diǎn)使得FISH技術(shù)在細(xì)胞生物學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用,例如用于研究基因表達(dá)、基因組變異和染色體異常等。
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