熒光原位雜交(FISH)技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn):
可多重染色:利用不同的熒光染料標(biāo)記不同的探針,可以實(shí)現(xiàn)多重?zé)晒庠浑s交,從而同時檢測多個序列,提高實(shí)驗(yàn)效率了。
高度創(chuàng)新性和性:FISH技術(shù)不僅可以用于研究已知基因或序列的染色體定位,還可以用于未基因或遺傳標(biāo)記及染色體畸變的研究,在基因定性、定量、整合、表達(dá)等方面的研究中頗具優(yōu)勢。
組織原位雜交(Tissue in situ hybridization),即原位雜交組織化學(xué)技術(shù)和原位雜交細(xì)胞化學(xué)技術(shù)
原位雜交技術(shù)的基本原理
利用核酸分子單鏈之間有互補(bǔ)的堿基順序,通過堿基對之間非共價鍵的形成,出現(xiàn)穩(wěn)定的雙鏈區(qū),形成雜交的雙鏈。
1.兩條核苷酸單鏈片段,在適宜的條件下,通過氫鍵結(jié)合,形成DNA-DNA、DNA一RNA或RNA一RNA雙鍵分子
2.應(yīng)用帶有標(biāo)記的(有性同位素,如3H、35S、32P,熒光素、生物素、等非性物質(zhì))DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細(xì)胞內(nèi)待測核酸(RNA或DNA)片段進(jìn)行雜交
3.用自顯影等方法予以顯示,在光鏡或電鏡下觀察目的mRNA或DNA的存在與定位
用原位雜交術(shù),可在原位研究細(xì)胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達(dá)。
此方法有很高的敏感性和特異性,可進(jìn)一步從分子水來探討細(xì)胞的功能表達(dá)及其調(diào)節(jié)機(jī)制。已成為當(dāng)今細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)研究的重要手段。
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