原位雜交技術(shù)在其他生物領(lǐng)域也有廣泛的應(yīng)用,例如:
植物學(xué)研究:在植物學(xué)研究中,原位雜交技術(shù)可以用于檢測(cè)和定位特定基因的表達(dá),研究基因組結(jié)構(gòu)和進(jìn)化。此外,還可以應(yīng)用于植物染色體組型分析、基因組印記研究等方面。
微生物學(xué)研究:在微生物學(xué)領(lǐng)域,原位雜交技術(shù)可以用于研究細(xì)菌、病毒等微生物的基因表達(dá)和定位,以及它們?cè)诃h(huán)境中的分布和相互作用。例如,通過標(biāo)記特異性探針,動(dòng)物組織原位雜交,可以檢測(cè)腸道微生物群落中的特定,研究其在人體健康和疾病發(fā)生中的作用。
一. 原位雜交天
1. 重新水化和固定
1) 吸取固定好的胚胎,加入50%的PBST溶液,放置5分鐘。
2) 置換成30%的PBST溶液,放置5分鐘
3) 置換成PBST溶液,放置5分鐘,重復(fù)一次
4) 置換成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘
5) 用PBST洗兩次,每次放置五分鐘,室溫。
蛋白酶處理與后固定(本實(shí)驗(yàn)不做此步)
1) 用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節(jié)以下的胚胎不處理,5體節(jié)到24小時(shí)的胚胎處理3分鐘,24小時(shí)以上的胚胎處理5分鐘或者更長。發(fā)育時(shí)間越短的胚胎越嫩,可以不用或者少用蛋白酶處理,發(fā)育時(shí)間長的胚胎就需要用蛋白酶來疏松組織,以便于雜交。
2) 用PBST溶液輕洗,在PBST中放置5分鐘。
3) 用4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘,室溫。
4) 用PBST洗兩次,每次放置五分鐘,室溫。
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